植物幾丁質(zhì)酶(chitinase)ELISA試劑盒中內(nèi)容(96孔)
1． 重組人VEGF凍干標(biāo)準(zhǔn)品，10ng/管，總2管。
2． 預(yù)包被抗人VEGF抗體的96孔板。
3． 樣品稀釋液，30ml。
4． *標(biāo)記抗人VEGF，120μl，效價(jià)1：100。
5． 抗體稀釋液，12ml。
6． 親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC），120μl，效價(jià)1：100。
7． ABC稀釋液，12ml。
8． TMB顯色液，10ml。
9． TMB終止液，10ml。
植物幾丁質(zhì)酶(chitinase)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材
1． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
2． 自動(dòng)洗板機(jī)。
3． 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器。
4． 干凈的試管和Eppendof管。
5． 使用中性PBS或TBS作為洗滌液。0.01M TBS配法為：1000ml H2O中加Tris 1.2g, NaCl 8.5g; 純乙酸450μl或濃鹽酸700μl左右調(diào)節(jié)pH值(7.2-7.6)。 0.01 M PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml蒸餾水中加氯化鈉8.5g, Na2HPO4·12H2O 3.5g, NaH2PO4·2H2O 0.25g。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將*的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
植物幾丁質(zhì)酶(chitinase)ELISA試劑盒操作程序
所有試劑用前需在室溫平衡。試劑或樣品稀釋時(shí)，切不可忘記混勻。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果估計(jì)樣品VEGF濃度＞2000pg/ml時(shí)，應(yīng)在試管中將樣品用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1． 確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加1孔作為T(mén)MB空白顯色孔?？倲?shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2． 將1000pg/ml ，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于人血清、體液、組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，每孔先加50μι樣品稀釋液，再加50μι樣品。
3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)120分鐘。
4． 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體（將自動(dòng)洗板機(jī)的洗滌次數(shù)設(shè)為零再開(kāi)始即可）；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。不洗。
5． 將準(zhǔn)備好的*抗人VEGF抗體工作液按每孔0.1ml依次加入（TMB空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng)60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。吸去或甩去多余液體。
7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入（TMB空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng)30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。吸去或甩去多余液體。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色液，37℃避光反應(yīng)20-25分鐘（此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯）。
10． 按每孔0.1ml依次加入TMB終止液，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11． 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值，將TMB空白顯色孔設(shè)為對(duì)照。
12． 所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后，在坐標(biāo)紙上畫(huà)出曲線，以吸光值作為縱坐標(biāo)，以濃度作為橫坐標(biāo)。
13． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算(下載)。應(yīng)記住由于樣品稀釋了1倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×2。
植物幾丁質(zhì)酶(chitinase)ELISA試劑盒操作程序總結(jié)：
1． 加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)120分鐘。不洗。
2． 加*標(biāo)記抗體，37℃反應(yīng)60分鐘。0.01M TBS洗滌3次。
3． 加ABC，37℃反應(yīng)30分鐘。0.01M TBS洗滌5次。
4． TMB37℃反應(yīng)20-25分鐘。
5． 加入TMB終止液，讀數(shù)。
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Eosin-Methylene Blue Lactose Agar
——用于大腸菌群測(cè)定
麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(MacC) ChP
MacConey Agar Medium
——用于大腸菌群測(cè)定
無(wú)鹽麥康凱瓊脂
MacConkey Agar Without Salt
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