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卡邁舒(上海)生物科技有限公司
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產(chǎn)品型號(hào)96T
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間:2015-03-06 09:33:15瀏覽次數(shù):201次
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小鼠β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)ELISA試劑盒操作寶典:
1. 抗原固定(包埋):將對(duì)應(yīng)疫苗用0.05M的碳酸鈉(Na2CO3)溶液稀釋至2 微克/毫升, 在96孔ELISA薄板上每孔加100μL, 于37度2小時(shí)或4度冰箱過(guò)夜。第二天
2. 封閉(BLOCKING):用PBSt沖洗薄板三次,每次必須把孔中液體拍掉. 再在每孔加1%脫指奶粉或BSA或0.1%吐溫(用PBSt稀釋)100μL,37度下放置30分鐘.
3. 用PBSt沖洗薄板3次,拍干孔中液體。
4. 滴度測(cè)試,每個(gè)樣本用8孔測(cè)試。
(1)如樣本為血清,則每孔加上100μL含5μg/mL抑制疫苗(用0.1%BSA的PBSt液稀釋),抑制疫苗為偶聯(lián)物和要檢測(cè)抗體的疫苗的偶聯(lián)物一樣的另一種疫苗。
(2)如樣本為已純化的抗體,則不用加抑制疫苗。
5. (1)血清樣本用含5μg/mL抑制疫苗溶液(用0.1%BSA的PBSt液稀釋)稀釋400倍.在*孔加100μL(總量為200μL/孔),混勻后移液100μL到第二孔,同樣混勻后從第二孔移液100μL到第三孔?????如此直至第7孔,留第八孔為空白對(duì)照。這樣從1-7孔的zui終樣本稀釋度分別為:1:800,1:1600,1:3200, 1:6400, 1: 12800, 1: 25600, 1: 51200。(2)抗體樣本則稀釋1000倍,混勻后移液50μL到第二孔.....至第七孔,留第八孔為空白對(duì)照。
6. 稀釋完后在37度反應(yīng)60分鐘.
7. 吸掉每孔中的液體,用PBSt分別清洗4次,每次拍干孔內(nèi)液體.
8. 上二抗:將抗兔IgG HRP用PBSt稀釋,稀釋倍數(shù)(1:5000-1:20000不等)由其濃度決定,每孔加100μL,37度反應(yīng)30分鐘后重復(fù)清洗步奏4次。
9. 拍干后每孔加入100μL的過(guò)氧化物酶(HRP)底物TMB生色. 37度大概15-30分鐘每孔加100μL2M硫酸終止反應(yīng),然后在酶聯(lián)測(cè)試儀于波長(zhǎng)450納米讀數(shù).
10. 結(jié)果判斷、記錄:計(jì)算OD為50%時(shí),血清(或抗體)的zui大稀釋度,以zui大稀釋度為樣品的滴度,記錄滴度,并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告相關(guān)人員。
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