內(nèi)毒素對生物應用的影響

   內(nèi)毒素強烈影響DNA轉染到原代細胞和敏感的培養(yǎng)細胞中，并且增加的內(nèi)毒素水平導致轉染效率急劇降低。此外，使用不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA用于基因治療是極其重要的，因為內(nèi)毒素可引起動物和人發(fā)燒、內(nèi)毒素性休克綜合征和補體級聯(lián)的活化。內(nèi)毒素還通過激活非特異性免疫應答，干擾體外轉染到巨噬細胞、B細胞等免疫細胞中。這些反應包括免疫介質(zhì)如IL-1和前列腺素的誘導合成。確保塑料制品、培養(yǎng)基、血清和質(zhì)粒DNA沒有LPS污染，避免誤導實驗結果。

內(nèi)毒素測定方法

   經(jīng)典的內(nèi)毒素測定基于內(nèi)毒素與鱟變形細胞中的可凝結蛋白之間的凝血反應?，F(xiàn)在可使用更靈敏的光度測定（例如，來自BioWhittaker,Inc的Kinetic-QCL Test），其基于鱟變形細胞溶胞產(chǎn)物（LAL）和合成的產(chǎn)生顏色的底物。LPS污染通常以內(nèi)毒素單位（EU）表示。通，1ng LPS對應于1-10EU。

內(nèi)毒素去除

   如今，內(nèi)毒素的去除都會使用商業(yè)化的試劑盒。一般利用多粘菌素B（polymixin B ）連接到瓊脂糖微球上，進行特異性去除內(nèi)毒素。多粘菌素B可通過靜電作用、離子作用、親水作用和分子之間的相互作用等多種因素吸附內(nèi)毒素，從而達到內(nèi)毒素去除的目的。

   在內(nèi)毒素去除過程中，我們要切記使用不含內(nèi)毒素的塑料制品和玻璃器皿。為了避免在初始內(nèi)毒素去除后對質(zhì)粒DNA的再污染，建議僅使用經(jīng)認證無熱原或無內(nèi)毒素的新塑料制品。無內(nèi)毒素或無熱原的塑料制品可以從許多不同的供應商處獲得。內(nèi)毒素強烈粘附于玻璃器皿，并且在洗滌期間難以*除去。標準實驗室高壓滅菌方法對內(nèi)毒素水平幾乎沒有或沒有影響。此外，如果高壓鍋先前已用于細菌，則玻璃器皿將被內(nèi)毒素分子廣泛污染。180°C過夜加熱玻璃器皿可破壞任何附加的內(nèi)毒素分子。重要的是不要通過使用含內(nèi)毒素的試劑純化無內(nèi)毒素DNA，所有緩沖液都需要無內(nèi)毒素。

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