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南京科捷檢測科技發(fā)展有限公司
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閱讀：3569發(fā)布時間：2017-5-15
油菜籽中一般含有10多種硫苷，而目前常用測定硫苷的反相色譜法，難以準確測定其中的吲哚類硫苷，因為在樣品預(yù)處理時要用硫酸酯酶對硫苷脫硫酸根，因此，樣品處理要放置過夜，使硫苷由離子型物質(zhì)轉(zhuǎn)化為醇類物質(zhì)后再上機分析。另外其操作步驟繁瑣，耗時過多。有報道采用反相離子對色譜法可直接測定十字花科植物中完整的硫苷，這種方法優(yōu)點在于樣品處理不需要用硫酸酯酶對硫苷脫硫酸根，當日處理的樣品即可上機分析，但對油菜籽中硫苷測定方法尚未*建立起來。本實驗在此基礎(chǔ)上對反相離子對色譜法測定油菜籽中硫苷的各種色譜條件、定性定量分析。
實驗主要儀器：
LC-600B智能全控液相色譜系統(tǒng)由1臺P600B高壓恒流泵、1臺UV600B紫外檢測器與1臺SCL600B系統(tǒng)控制器直接構(gòu)成梯度分析系統(tǒng)。*采用柱塞浮動式安裝方式，增強儀器性能的穩(wěn)定性和使用的持久性。
廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
樣品預(yù)處理：
反相離子對色譜法：稱取脫脂菜籽0.4000g于干燥有刻度試管中， 在沸水中干蒸10min后加入8ml沸水提取20min，冷卻后加入內(nèi)標物溶液1ml（烯丙基硫苷，1mmol／L），再加入0.5mol／L醋酸鉛和醋酸鋇混合液1ml，搖勻后水浴上溫熱，放置稍冷后離心10min。取上清液 2.5ml加入到DEAE-葡聚糖凝膠A-25（5mm×100mm） 層析小柱中，待溶液流干后，用約5ml醋酸吡啶洗滌，再用重蒸水洗滌。zui后用0.5mol／L硫酸鉀溶液4ml洗脫，收集洗脫液并定容到10ml，搖勻后用微孔過濾器過濾，濾液供色譜分析。與此同時進行反相色譜法的樣品預(yù)處理，用作對照。
色譜條件：
色譜柱 | YWG-C18H37（10μm，250mm×4mm） |
柱溫 | 30℃ |
流動相 | 含4.5mmol／L四丁*的0.02 mol／L磷酸緩沖液（pH=6） 和乙腈（90／10，v／v） |
流速 | 1ml／min |
色譜圖：
油菜籽中硫苷分離的色譜圖
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