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人降鈣素(CT)elisa試劑盒檢測原理:
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
人降鈣素(CT)elisa試劑盒測試步驟:
(1)仔細切開覆蓋在孔板上的箔片,從微孔板底部用手指輕輕頂出所用的孔板。注意不要損傷不使用的孔板上的條或孔,而且應(yīng)將其立即用塑料袋密封放入2-8℃的冰箱保存,以防止瓊脂變干;
(2)揭開覆蓋在孔板上的箔片,每孔加入80mL牛奶樣品。并分別加入80mL的陰性和陽性質(zhì)控,加入樣品時應(yīng)避免交叉污染;
(3)用密封膠將孔板密封,置于65℃恒溫箱或水浴箱中孵育直到陰性質(zhì)控轉(zhuǎn)化成淺黃綠色(參照每批質(zhì)量檢測報告,大約需要1小時45分鐘)。
注:如果是采用水浴進行孵育的話,請注意避免水進入微孔。樣品孵育時間不能超過質(zhì)檢報告中說明的時間,否則檢測靈敏度會下降。
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