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“兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3elisa試劑盒"間接法步驟：
1．用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2．次日洗滌3次；
3．加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4．（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5．37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6．zui后一遍用DDW洗滌。
7．加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
8．終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
9．結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
安全注意事項：
1．避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。
4．elisa試劑盒請遠離兒童。
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