產(chǎn)品名稱:蓖麻凝集素elisa試劑盒
保存溫度:2-8℃
保質(zhì)期:6個月
運輸方式:快遞
運輸貨期:1-2周
備注:本試劑僅供科研,不得用于臨床
試驗原理:
蓖麻凝集素elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)。已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將已知濃度的標準品和*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
實驗意事項
1.血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
2.在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液。
3.吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準確。
4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶,如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。1.5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
5.液體全部加入酶標孔后,將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充分混合均勻,也使其得到充分的反應。
6.孵育時要使蓋板膜封好酶標板,防止水分蒸發(fā),以防曲線不成線性。
7.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同,酶標板只要取出所需量。
8.由于底物顯色劑對光及其敏感,因此要避光保存。
要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色
9.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
10.檢測吸光度前應將酶標儀打開,將其預熱30min以上。
11.底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃**具有腐蝕性,應盡量避免接觸皮膚。
12.孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。
13.要盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。
14.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
15.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。
16.沒有去離子水或雙蒸水時,可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。
17.標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。