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光遺傳技術(shù)為細(xì)胞結(jié)構(gòu)研究帶來(lái)機(jī)遇

時(shí)間:2016-1-5閱讀:52
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從現(xiàn)在開始10年后,這種技術(shù)將會(huì)成為發(fā)育生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)界人人使用的工具。是紐利用Gardner和其他蛋白質(zhì)工程師研發(fā)的工具,科學(xué)家現(xiàn)在可以利用LED或激光閃光對(duì)諸如信號(hào)傳導(dǎo)或信號(hào)移動(dòng)過程進(jìn)行微觀層面的管理,而不是僅僅觀察這些光。例如,他們能夠輕而易舉地打開或關(guān)閉蛋白,或是在細(xì)胞內(nèi)來(lái)回移動(dòng)細(xì)胞器。
過去幾年,蛋白質(zhì)工程技術(shù)研發(fā)了十余種光敏感工具,用來(lái)完成這些特殊的研究。光在通過常規(guī)方法操作細(xì)胞活動(dòng)時(shí)可提供重要優(yōu)勢(shì)。其中一個(gè)優(yōu)勢(shì)是速度,化學(xué)物質(zhì)要用數(shù)分鐘進(jìn)入細(xì)胞,而光需要的時(shí)間不到一秒。

其另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是光遺傳學(xué)能夠提供的空間控制:不是對(duì)培養(yǎng)皿中的每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行同一種小分子治療,而是細(xì)胞生物學(xué)家可以用高度聚焦的燈光打開一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的開關(guān),或者甚至是單個(gè)細(xì)胞的部分開關(guān)。
光遺傳學(xué)首先活躍于神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域:光控制通道可以按照意愿用來(lái)制造神經(jīng)元。但現(xiàn)在分子生物學(xué)家也在積極地?fù)肀н@種技術(shù)。

蛋白質(zhì)伴侶
光遺傳學(xué)中zui常見的技術(shù)之一是設(shè)計(jì)兩個(gè)在光存在時(shí)可以相互結(jié)合的蛋白,形成一個(gè)“二聚物”??茖W(xué)家有時(shí)會(huì)通過化合物形成二聚物,用光形成這種二聚物仍然相對(duì)新穎。生物學(xué)上蛋白—蛋白相互作用讓光誘導(dǎo)成的二聚作用成為游戲改變者。

生物物理學(xué)家利用光誘導(dǎo)的二聚作用,把個(gè)體層面的細(xì)胞器像屋子里的家具那樣安排開來(lái)??茖W(xué)家zui近認(rèn)識(shí)到,細(xì)胞也會(huì)遵從一定的“風(fēng)水”環(huán)境。例如,如果有很多營(yíng)養(yǎng),溶酶體(代謝細(xì)胞器)會(huì)停留在細(xì)胞的邊緣,提高新蛋白的產(chǎn)量;但是當(dāng)細(xì)胞處于饑餓狀態(tài)時(shí),溶酶體會(huì)撤退到細(xì)胞內(nèi)部,在那里它們會(huì)鼓勵(lì)細(xì)胞消化自身。在藍(lán)光下,原子核附近的過氧化物會(huì)和驅(qū)動(dòng)蛋白結(jié)合,從而把它們“拖拽”到細(xì)胞外圍。
然而,細(xì)胞結(jié)構(gòu)很難拆開。Kapitein的光遺傳方法提供了調(diào)解一種細(xì)胞器的能力,而且是可逆的。他利用的主要光遺傳工具是可調(diào)光誘導(dǎo)二聚作用標(biāo)簽(TULIPS),這種工具的基礎(chǔ)是來(lái)自燕麥的LOV感光器和以普通PDZ序列為基礎(chǔ)的基因工程改造的蛋白—蛋白互動(dòng)區(qū)域。LOV螺旋中隱藏著一個(gè)小肽,當(dāng)接觸藍(lán)光后,會(huì)和PDZ區(qū)域相結(jié)合。
研究人員把TULIP設(shè)置應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)體的位置如何影響神經(jīng)元中的軸突生長(zhǎng)。他們從軸突移除了核內(nèi)體,使軸突停止伸展。他們又在其中加入額外的核內(nèi)體,發(fā)現(xiàn)軸突會(huì)生長(zhǎng)得更快。因此,和線粒體一樣,這些核內(nèi)體的位置會(huì)影響細(xì)胞的形狀。
這種體系在很多細(xì)胞器中都會(huì)發(fā)揮作用,Kapitein說,從而讓科學(xué)家可以提出一些此前從未解答的關(guān)于細(xì)胞單元結(jié)構(gòu)的問題。他已經(jīng)收到數(shù)十個(gè)細(xì)胞生物學(xué)家的請(qǐng)求,他們希望重新排列自己重視的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。未來(lái),他希望找到一種移動(dòng)單個(gè)細(xì)胞器以及使其停留在所希望位點(diǎn)的方法。
意向信號(hào)
在細(xì)胞內(nèi)有所作為,生物學(xué)家不需要改變整個(gè)細(xì)胞器的位置。很多信號(hào)通道都是從一些外部因子和細(xì)胞膜上的受體結(jié)合開始,然后是把信息從內(nèi)部一種蛋白向另一種傳輸?shù)募?jí)聯(lián)反應(yīng),比如基因表達(dá)的轉(zhuǎn)變??茖W(xué)家經(jīng)常通過區(qū)分參與通道早期的蛋白,并把它們轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)膜來(lái)模仿這種效應(yīng)。當(dāng)?shù)鞍椎竭_(dá)細(xì)胞膜后,會(huì)表現(xiàn)出已經(jīng)收到外部信號(hào)的狀態(tài),并開啟下游的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。

利用了光敏色素B(PhyB)—PIF二聚體系,光遺傳學(xué)家從植物遺傳學(xué)家zui鐘愛的植物——擬南芥中提取到這種色素。在這種植物中,可見紅光會(huì)導(dǎo)致PhyB結(jié)合并激活PIF轉(zhuǎn)錄因子,擬南芥用這一機(jī)制打開一些參與種子發(fā)芽以及避蔭生長(zhǎng)等過程的基因。但是和其他在黑暗中關(guān)閉的光遺傳系統(tǒng)不同,當(dāng)PhyB和PIF 接觸到波長(zhǎng)更長(zhǎng)的紅外線之后,就會(huì)不再穩(wěn)定。Toettcher把PhyB和細(xì)胞質(zhì)膜相結(jié)合,并把部分PIF和Ras激活因子相結(jié)合。當(dāng)打開紅光后,Ras也會(huì)被打開。
因?yàn)槟軌蛴眉t外光打開與關(guān)閉Ras,因此Toettcher能夠地控制其激活時(shí)間,從而讓下游的反應(yīng)發(fā)生很大變化。例如,打開一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的Ras會(huì)導(dǎo)致其鄰居STAT3(一種可以在細(xì)胞生長(zhǎng)和死亡等過程中發(fā)揮作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子)磷酸化。兩個(gè)小時(shí)的持續(xù)性紅光會(huì)刺激STAT3 磷酸化,但是一小時(shí)的紅光、15分鐘的紅外光以及其他時(shí)間長(zhǎng)度的紅光都不能發(fā)生這種作用,infrared light說。研究人員并不清楚在Ras信號(hào)延伸后,STAT3被用于什么用途,他們猜測(cè),這種系統(tǒng)會(huì)通過改變細(xì)胞外的輸入時(shí)間,讓一個(gè)細(xì)胞把同樣的通路應(yīng)用于各種目的。
基因翻轉(zhuǎn)
只有經(jīng)過一連串的中間反應(yīng)步驟后,細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)(比如 Toettcher的研究)才會(huì)影響基因激活作用。但是光遺傳工具會(huì)直接改變基因表達(dá),或者甚至誘導(dǎo)基因組發(fā)生*改變。  類似這樣的光遺傳CRISPR工具對(duì)于那些想要在生物體內(nèi)跟蹤細(xì)胞活動(dòng)的科學(xué)家來(lái)說特別有用,Hahn說。光遺傳技術(shù)可以讓科學(xué)家利用光開關(guān)激活單個(gè)基因或蛋白,下一步將是利用整個(gè)光譜控制生物學(xué)過程。
當(dāng)前,光遺傳技術(shù)也存在短板。其中之一是很多系統(tǒng)存有漏洞,因?yàn)樗鼈冏屢恍┗顒?dòng)在黑暗中也能進(jìn)行。而且光本身也會(huì)影響諸如轉(zhuǎn)錄以及信號(hào)傳導(dǎo)等細(xì)胞活動(dòng)。這意味著科學(xué)家在控制這些負(fù)面效應(yīng)時(shí)應(yīng)該更加謹(jǐn)慎。
其他缺點(diǎn)還包括光敏感系統(tǒng)需要一種叫作生色團(tuán)(色基)的化學(xué)物質(zhì),如果科學(xué)家想要研究的細(xì)胞不能生成這種色基,科學(xué)家就要進(jìn)行添加。因此會(huì)帶來(lái)不便。此外,因?yàn)檫@種工具非常新穎,它們的使用仍然存在各種困難。
細(xì)胞生物學(xué)家期待未來(lái)能夠更容易地利用光遺傳技術(shù)。從好的一方面來(lái)看,這一技術(shù)包裹中的發(fā)光技術(shù)相對(duì)容易。這種可獲得性將會(huì)讓以光為基礎(chǔ)的工具,如微生物和肽等成為細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)。

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