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江蘇晶美生物科技有限公司

elisa試劑盒間接法操作步驟

時間:2015-2-2閱讀:420
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elisa試劑盒間接法是目前zui常用的方法之一,主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷,而該方法的操作步驟主要有:

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;

2.次日洗滌3次;

3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;

5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

6.zui后一遍用DDW洗滌;

7.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘;

8.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml;

9.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

間接法成功的關鍵在于抗原的純度,另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。

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