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技術(shù)文章

體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟

閱讀：158發(fā)布時間：2015-7-23

1.瘤細(xì)胞懸液接種 
（1）無菌選取生長良好瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細(xì)胞。    
（2）在PBS中將瘤*碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細(xì)胞懸液。 
（3）培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍。 
（4）計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至107～108／ml。 
（5）常規(guī)消毒后，于接種部位。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些。 
（6）次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，zui后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。 
2.腹水瘤的建立與腹水瘤的接種　將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。 
（1）將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行 細(xì)胞計數(shù) 。 
（2）消毒動物，左下腹穿刺接種106腹水瘤細(xì)胞。 
（3）接種腹水瘤細(xì)胞后約7~12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。 
（4）抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/span>


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