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技術(shù)文章

ELISA檢測樣品的處理方法

閱讀:313發(fā)布時間:2014-12-15

   通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法:

1.血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。

采血過程中應(yīng)避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應(yīng)避免細菌污染,因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

2.血漿

用含抗凝劑的*或離心管采集血液標本,標本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

3.細胞培養(yǎng)上清

取細胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

4.細胞裂解液

5.組織勻漿液

6、尿液、唾液等其他液體生物樣本

ELISA的類型有:

ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:

(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);

(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);

(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。

用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:

1.雙抗體夾心法測抗原

雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:

1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2)加受檢標本,保溫反應(yīng)。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3)加酶標抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。

4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標本中抗原的量。

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