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試驗(yàn)室細(xì)胞搜集的具體辦法過程

閱讀：216發(fā)布時(shí)間：2017-9-11

試驗(yàn)室細(xì)胞搜集的具體辦法過程,試驗(yàn)室搜集細(xì)胞，關(guān)于細(xì)胞的研討極為重要，如何搜集細(xì)胞成為試驗(yàn)室的必做項(xiàng)目之一，那么下面上海紀(jì)寧的博士就帶大家一同來了解下以下三種辦法：

WB搜集細(xì)胞：
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉，用PBS清洗兩次，運(yùn)用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮，將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min，棄上清，保存底層細(xì)胞。如要裂解細(xì)胞6孔板（99ulRIPA+1ulPMSF）,細(xì)胞培養(yǎng)皿（198ulRIPA+2ulPMSF），若要做磷酸化蛋白則加如1ul按捺磷酸化蛋白降解按捺劑，參加細(xì)胞裂解液后用移液器將細(xì)胞吹勻，冰上靜置5min，離心4℃ 12500g/5min，汲取上清液，置于-80℃冰箱；若不裂解細(xì)胞，將細(xì)胞置于-80℃冰箱。

一般PCR搜集細(xì)胞：
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉，用PBS清洗兩次，運(yùn)用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮，將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min，棄上清，保存底層細(xì)胞。將細(xì)胞置于-20℃冰箱。

qRT-PCR搜集細(xì)胞：
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉，用PBS清洗兩次，運(yùn)用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮，將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min，棄上清，保存底層細(xì)胞。參加1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。（留意：本試驗(yàn)需運(yùn)用耗材和試劑都為無RNA酶，PBS有必要高壓，離心管和槍頭有必要無酶


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