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技術(shù)文章

如何降低ELISA的背景

閱讀:210發(fā)布時(shí)間:2017-6-14

ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,ELISA試劑盒這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。ELISA試劑盒背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,上海紀(jì)寧總結(jié)如下:
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。

如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時(shí)間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
抗體濃度須優(yōu)化
ELISA實(shí)驗(yàn)我們通常會(huì)follow師兄師姐留下來的操作步驟,ELISA試劑盒但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過多的一抗
或二抗。
檢測(cè)試劑要適量
另一點(diǎn)也很顯而易見:切勿使用過多的檢測(cè)試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。


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