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技術文章

如何降低ELISA的背景

閱讀:211發(fā)布時間:2017-6-14

ELISA實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,ELISA試劑盒這在很大程度上取決于結果的信噪比。ELISA試劑盒背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景,上海紀寧總結如下:
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關鍵
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。

如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
抗體濃度須優(yōu)化
ELISA實驗我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,ELISA試劑盒但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗
或二抗。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時應加入終止液。


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