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避光使用下ELISA試劑盒顯色反應(yīng)更準確

閱讀:436發(fā)布時間:2016-12-22

這類反響的ELISA試劑盒定性作用可以用肉眼區(qū)別。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中,正常人血清反響后常可出現(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因ELISA試劑盒的構(gòu)成和試驗的條件不一樣而異,因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼區(qū)別作用時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的政策。此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在一定時刻內(nèi),陰性孔可堅持無色,而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當前進溫度有助于加快顯色進行。ELISA試劑盒在定量測定中,參加底物后的反響溫度和時刻應(yīng)按規(guī)則力求。ELISA試劑盒定性測定的顯色可在室溫進行,時刻通常不需要嚴格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的恰當縮短或延伸反響時刻,及時區(qū)別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深,再延伸反響時刻,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反響結(jié)束時參加間斷液間斷反響。OPD產(chǎn)品用硫酸間斷后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大,ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上,邊反響查詢作用。但為確保試驗作用的穩(wěn)定性,宜在規(guī)則的恰當時刻閱讀作用。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達高峰,隨即逐步削弱,ELISA試劑盒至2小時后即可*衰退至無色。TMB的間斷液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響間斷。這類間斷劑尚能使藍色堅持較長時刻(12-24小時)不褪,是目視區(qū)別的出色間斷劑。此外,各類酸性間斷液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此刻可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。

 


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