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ELISA試劑盒操作條件大盤點

閱讀:191發(fā)布時間:2016-11-29

ELISA試劑盒可用于測定抗原,也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本,干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體,②酶標記的抗原或抗體,③酶作用的底物。
ELISA試劑盒操作步驟
ELISA試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。ELISA試劑盒重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
根據(jù)ELISA試劑盒試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。  (一)雙抗體夾心法
(二)雙位點一步法
(三)間接法測抗體
(四)競爭法
(五)捕獲法測IgM抗體
(六)應(yīng)用親和素和*
ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種方法中, 通常標準配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵. ELISA試劑盒通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體, 而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色.


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