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ELISA試劑盒的酶標抗原與固相抗體

閱讀:266發(fā)布時間:2016-10-31

  ELISA試劑盒通常常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假如包被的抗原在堿性條件下不安穩(wěn)的話,也能夠運用pH7.2的磷酸鹽緩沖液.

3.包被溫度的挑選

  通常是4-8度條件下過夜或許37度保溫2小時,咱們強烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅持.  

4.包被濃度的挑選

  包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,通常蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要清晰對于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過試驗來斷定.  

包板后需求關(guān)閉嗎?應(yīng)當挑選什么樣的關(guān)閉系統(tǒng)?  

  關(guān)閉是否必要,取決于ELISA試劑盒的形式及詳細的試驗條件.通常說來,雙抗體夾心法,只需酶符號物是高活性的,操作時洗刷*,不經(jīng)關(guān)閉也可得到滿足的成果.而在直接法測定中,關(guān)閉通常是*的.

   以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競賽與固相抗體,因而于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成反比。操作過程如下:

(1)將特異抗體與固相載體銜接,構(gòu)成固相抗體。洗刷。

(2) 待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反響。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原能順暢地與固相抗體。如受檢標本中含有抗原,則 與酶標抗原以同樣的時機與固相抗體,競賽性地占去了酶標抗原與固相載體的時機,使酶標抗原與固相載體的量削減。參閱管中只加酶標抗原,保溫 后,的可達zui充分的量。

(3)加底物顯色:參閱管中因為的酶標抗原zui多,故色彩zui深。參閱管色彩深度與待測管色彩深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管色彩越淡,表明標本中抗原含量越多。

  ELISA試劑盒直接法、競賽法、捕獲法,運用親和素和*的ELISA試劑盒親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中獲取。分子量60kD,每個分子由4個亞基構(gòu)成,能夠和4個*分子親密。如今運用更多的是從鏈霉菌中獲取的鏈霉親和 素。*又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學辦法制成的衍生物,*-羥 基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的巨細分子構(gòu)成*化的產(chǎn)品。親和素與*的,雖不屬免疫反響,但特異性強,親和力大, 兩者一經(jīng)就極為安穩(wěn)。因為1個親和素分子有4個*分子的方位,能夠銜接更多的*化的分子,構(gòu)成一種相似晶格的復(fù)合體。因而把親和素和生物 素與ELISA試劑盒偶聯(lián)起來,就可大大提高ELISA試劑盒的敏感度。

 


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