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閱讀:307發(fā)布時(shí)間:2016-10-14
ELISA檢測試劑盒在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本( S)和陰性對(duì)照(N)的A 值后,計(jì)算S/N 值。也有寫作P/N 的,這里的P 不代表陽性(positive),而是病人(pati ent)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N 表示。在早期的間接法ELISA檢測試劑盒中,有些作者定出S/N 為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用。實(shí)際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的 S/N 的閾值。更應(yīng)注意的是,N 所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。定性測定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出 "有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。
ELISA檢測試劑盒在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。在間接法和夾心法 ELISA檢測試劑盒中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA 中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。
兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,分述于下。在ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA檢測試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
ELISA檢測試劑盒有此測定(如間接法ELISA試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。
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