糖異生_磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，催化草酰乙酸轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸，是調(diào)節(jié)糖異生途徑的關(guān)鍵酶。
糖異生_磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK測試盒
測定原理：
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體18 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：液體16.5uL×1支，4℃保存；
試劑三：粉劑×1支， -20℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑四的配制：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、將工作液和試劑四置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。
5、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑四和180μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和 1min后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當倍數(shù)后測定，使ΔA小于0.1可提高檢測
靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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