組織無機磷含量測試盒_離子系列_分光光度法
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
無機磷主要指磷酸根,參與生物體內(nèi)多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等,此外促進碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運。
組織無機磷含量測試盒_離子系列_分光光度法
測定原理:
鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì),通過測定660nm光吸收可計算無機磷含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入20 mL蒸餾水,充分溶解后加入試劑二(全部),混勻。
標準品:液體×1支, 4℃保存。
無機磷提?。?/p>
按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。10000rpm,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定:
1. 分光光度計預熱30 min,調(diào)節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 打開水浴鍋,調(diào)節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,依次加入50μL標準液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 測定管:取EP管,依次加入50μL上清液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。