過(guò)氧化氫酶CAT測(cè)試盒(鉬酸銨比色法)_分光法
測(cè)定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
測(cè)定意義:
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
過(guò)氧化氫酶CAT測(cè)試盒(鉬酸銨比色法)_分光法
測(cè)定原理:
過(guò)氧化氫能氧化MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氫氧根的電子成鍵,分子間立即脫水縮合,得到穩(wěn)定的復(fù)合物(H2MoO4·XH2O)n在405nm處有強(qiáng)烈吸收峰,其吸光值和過(guò)氧化氫濃度成線(xiàn)性關(guān)系。測(cè)定出體系剩余過(guò)氧化氫在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體60 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體6 mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:液體18 mL×1瓶,常溫保存;
試劑三:液體45 mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。