氧化與抗氧化系列_單寧含量測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測(cè)定前取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
單寧是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物,又稱植物多酚。具有化學(xué)性質(zhì)和多種生理活性,如能與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖結(jié)合;能與多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合或靜電作用;具有止血、抑制微生物、抗過敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。
氧化與抗氧化系列_單寧含量測(cè)試盒
測(cè)定原理:
單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應(yīng),生成藍(lán)色化合物,在760nm處有大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體4mL× 1瓶,4℃保存;
試劑二:液體3mL × 1瓶,4℃保存;
單寧的提?。?nbsp;
按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min, 8000 g,25℃離心10 min,取上清液待測(cè)。
單寧含量計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 1.6418x +0.0134;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為ΔA(A測(cè)定-A對(duì)照)。
2、按樣本鮮重計(jì)算:
單寧含量(mg /g鮮重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(W×V1÷V2)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.005mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.8209x+0.0134;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為ΔA(A測(cè)定-A對(duì)照)。
2、按樣本鮮重計(jì)算:
單寧含量(mg/g鮮重)=[(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(W×V1÷V2)=1.218×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(V1×Cpr)=1.218×(ΔA-0.0134)÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.005mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。