淀粉系列_淀粉脫分支酶(DBE)測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
DBE能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣摩?1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長(zhǎng)方面有重要的作用。
測(cè)定原理：
采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過測(cè)定還原糖含量的變化來計(jì)算DBE活性。
需自備的的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
淀粉系列_淀粉脫分支酶(DBE)測(cè)試盒
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入6mL試劑一，充分混勻后備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體35mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
DBE活力單位的計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件測(cè)定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件測(cè)定回歸方程為y = 1.9229x - 0.165；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘
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