土壤系列_土壤亮-氨酸氨基肽酶(S-LAP)測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮-氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
土壤系列_土壤亮-氨酸氨基肽酶(S-LAP)測(cè)試盒
測(cè)定原理:
S-LAP分解L-亮氨酰對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺,后者在405nm有大吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算S-LAP活性。
自備用品:
酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體35mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
S-LAP測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm,蒸餾水調(diào)零。
2、在試劑二瓶中加入15mL試劑一充分溶解(如較難溶解,可60℃水浴加熱約30min促進(jìn)溶解);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
3、操作表
試劑名稱對(duì)照管測(cè)定管
新鮮土樣(g)0.050.05
試劑一(μL)300
試劑二(μL)300
混勻, 37℃振蕩反應(yīng)1h后,8000g 4℃離心10min,S-LAP活力單位的計(jì)算:
取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,405nm處測(cè)定吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。