氨基酸代謝系列_羥脯-氨酸(HYP)測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
氨基酸代謝系列_羥脯-氨酸(HYP)測(cè)試盒
測(cè)定原理：
樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲氨基苯-甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣品水解液560nm吸光值，可計(jì)算HYP含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、烘箱、玻璃管、離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、無(wú)水乙醇、異丙醇、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
試劑組成和配制：
組織提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃鹽酸：H2O（V/V）= 1:1，室溫保存。
細(xì)胞提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。
羥脯-氨酸提取：
1.組織：稱取約0.2g樣品于玻璃管，加入2mL的組織提取液，置于110℃烘箱，水解6至12小時(shí)，用提取液定容至2mL，12000g，25℃，離心20min，取上清待測(cè)。
2.細(xì)胞：取約500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，加入1mL的細(xì)胞提取液，于高壓消毒器中15磅保持30min，自然降壓后待測(cè)。
3.血清游離羥脯-氨酸提?。喝?.1mL血清，加入0.5mL無(wú)水乙醇使蛋白質(zhì)沉淀，8000g4℃離心5min。將上清倒入另一個(gè)EP管，氮吹或沸水浴將乙醇揮發(fā)干。冷卻后再加入0.2mL50%異丙醇，充分溶解混勻待測(cè)。
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