谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)測試盒_氨基酸代謝系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
GPT(EC 2.6.1.2)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),在氨基酸代謝中具有重要作用。此外,哺乳動物肝細胞GPT活性很高,當肝細胞壞死,GPT釋放到血液中,血清GPT活性顯著增高。因此,GPT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害敏感的檢測指標。
谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)測試盒_氨基酸代謝系列
測定原理:
GPT催化丙-氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成丙酮酸和谷-氨酸;加入2,4-二硝-基苯肼溶液,不僅終止上述反應(yīng),而且與酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在堿性條件下呈紅棕色,可以在505nm讀取吸光值并計算酶活力。
試驗中所需的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:30mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:液體5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑三:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
樣品測定的準備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。