半胱-氨酸(Cys)含量測(cè)試盒_氨基酸代謝系列
測(cè)定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸:甲硫-氨酸、胱-氨酸和Cys。其中,Cys是唯-一一種含有巰基的含硫氨基酸,從甲硫-氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái),并且可與胱-氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成,經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,并且補(bǔ)充巰基,以維持皮膚的正常代謝,調(diào)節(jié)表皮下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。
半胱-氨酸(Cys)含量測(cè)試盒_氨基酸代謝系列
測(cè)定原理:
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍(lán),在600nm處有吸收峰;通過(guò)600nm吸光度,計(jì)算Cys含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、85%磷酸和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。用前1天,向試劑三中加5 mL蒸餾水充分溶解,再加85%磷酸1.25mL,混勻后蓋緊(防止水分散失)沸水浴2h;冷卻后加20 mL蒸餾水,4℃可保存2周。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。用不完的試劑4℃可保存3天。
半胱-氨酸提取:
1、液體樣品中半胱-氨酸提?。喝?.1mL液體樣品,加試劑一0.9mL,充分混勻,8000g
4℃離心10min,取上清液,待測(cè)。
2、組織中半胱-氨酸提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10 min,取上清液待測(cè)。
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。