糖代謝系列_濾紙酶測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
測(cè)定意義：
纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系，能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖，研究濾紙酶活力對(duì)纖維素酶的研究具有非常重要的意義。
糖代謝系列_濾紙酶測(cè)試盒
測(cè)定原理：
濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物，在540nm處有大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比，可測(cè)定計(jì)算得濾紙酶的活力。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體40mL×1瓶，4℃保存。
濾紙條：50mg×50條。
酶液提?。?/p>
1.組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，冰浴勻漿后于4℃，12000rpm離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，12000rpm離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3.培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作：
1.根據(jù)樣本數(shù)量取兩倍數(shù)量的濾紙條和Ep管，每支Ep管中放入一個(gè)卷狀濾紙條（注意要放入底部），作為底物。
2.對(duì)照管：取200μL滅活的酶液，加入500μL試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的Ep管中，標(biāo)注為對(duì)照管。
3.測(cè)定管：取200μL酶液，加入500μL試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的Ep管中，標(biāo)注為測(cè)定管。
4.對(duì)照管和測(cè)定管同時(shí)置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min。
5.加入800μL試劑二，沸水浴5min，自來水冷卻后取200μL于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定540nm處吸光值，分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A= A測(cè)定管- A對(duì)照管。
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