ELISA試劑盒檢測步驟是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。elisa試劑盒檢測步驟不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本 ,因此也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。elisa試劑盒檢測步驟不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此elisa試劑盒檢測步驟在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大。
ELISA試劑盒檢測步驟：
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；elisa試劑盒檢測步驟混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為60μmol/L，40μmol/L ，20μmol/L，10μmol/L， 5μmol/L）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。elisa試劑盒檢測步驟在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。 
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，elisa試劑盒檢測步驟每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。 8.洗滌：操作同5。 
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。
11.測定：ELISA試劑盒以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。