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根據(jù)我公司進口ELISA試劑盒實驗技術(shù)部多年的經(jīng)驗以及客戶們的咨詢問題總結(jié),整理分析出了幾個需要嚴格注意的方面,實驗者們隨上海恒遠來看一看吧(供參考)。
1. 讀板時板底不清潔:難免洗板后板底有水漬,這也可能導致讀數(shù)不準。
2. 溫育溫度的選擇
說明書表明的溫度可有兩種(①37℃下1小時、②43℃下45分鐘),從免疫測定的抗原抗體反應的本質(zhì)來看,在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。上海恒遠生物建議在臨床ELISA試劑盒測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。
3. 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉:曾用洗瓶直接沖洗板。后來雖然也用槍逐孔洗板,但對此注意不夠。
4. 加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡:終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。
5. 加樣板過多、加樣速度慢,造成各孔反應時間不均一:但溫度高時,加樣時間過長將導致各孔時間的反應時間不均一;還使得孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。如果連續(xù)做好幾塊板,則有可能使某些板不能及時洗板,也導致孵育時間人為延長。
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