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我司解析細胞培養(yǎng)基預防污染的方法

時間:2020-5-6閱讀:1117
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細胞培養(yǎng)基受各種霉菌、細菌和支原體污染后,一般都較難排除或殺滅,其中以支原體更難排除,因此從預防著眼為上。

一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環(huán)素衍生物)抑制支原體。

1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃?zhèn)溆谩?/p>

2.處理:取受支原體污染的細胞,吸除培養(yǎng)液,加入含BM-1的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)3天后,吸除培養(yǎng)液,再加入含BM-2的1640培養(yǎng)液培養(yǎng)4天,如此連續(xù)三個輪回。

3.檢測:用33258熒光染色鏡檢(每個輪回末應檢測一次)。

4.培養(yǎng):清除支原體后的細胞,在不加上述抗生素的培養(yǎng)基液中,再傳代培養(yǎng)3~4次。

5.鏡檢:如清除不*可再進行處理至純凈為止(一般3個輪回即能被*消除),即先用含BIP培養(yǎng)液培養(yǎng)12天后,再按上述方法處理。

二、加溫除菌法

把受污染的細胞置41℃中作用5~10小時。

三、動物體內接種除菌法

把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中,借動物免疫系統(tǒng)消滅支原體,而腫瘤細胞卻能在體內繼續(xù)生長,待一定時間后,從體內取出細胞培養(yǎng)基再進行培養(yǎng)繁殖。

四、巨噬細胞吞噬法

從動物腹腔采取巨噬細胞,為排除其它細胞成分,可先進行純化,然后再加入被支原體污染的細胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,為檢查支原體是否已被消除干凈,可利用支持物培養(yǎng)法驗證,取出支持物逐日染色、鏡檢觀察,至支原體已被消除干凈為止。

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