培養(yǎng)細胞可不是一件簡單的事，一不小心就出現(xiàn)污染的情況，捧著被污染的細胞感嘆∶細胞真是太難養(yǎng)了。細胞一旦污染就很難救回來，更嚴重的是一個細胞的污染可能會導(dǎo)致實驗室內(nèi)細胞全部受到影響。下面，帶大家了解一下出現(xiàn)污染后的應(yīng)對方法。

1.細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。

解決方法:仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風(fēng)時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次s則可能會導(dǎo)致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意!下次使用要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生素。

2.支原體污染

支原體是隱藻的污染物，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象﹐比如細胞病變和濁度或p值變化《即使在嚴重污染的培養(yǎng)基中>﹐這樣就會導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯誤的安全感。而在牛血清中，支原體是常見的微生物。

解決方法:通常的過濾滅菌方法對支原體沒有影響。細胞一旦被支原體污染>特別是對重要的細胞系，必須去除支原體，一般的方法有抗生素治療﹑抗血清治療和抗血清與補體聯(lián)合治療。值得注意的是，支原體突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁。因此，它對作用于細胞壁的生物合成抗生素(如β-內(nèi)酰胺類等>不敏感，并且通常對多粘菌素和磺胺類藥物具有耐藥性。相反，四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)噩類抗生素對支原體的抑制作用強，而氨基糖苷類的抑制作用較弱。

3.黑點污染

黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑色斑點。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細胞仍可使用。通常，黑點污染后，細胞生長良好，運動物體無明顯增加·培養(yǎng)基的顏色和逶明度無明顯變化·在同一批血清培養(yǎng)的細胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。

解決方法:黑點對細胞生長狀態(tài)沒有明顯影響，細胞增殖后會自然消失，因此除了血清置換外，無需特殊處理。如果細胞可能被小的運動點污染，建議增加培養(yǎng)皿細胞密度，以提高細胞存活率。

4.真菌污染

真菌污染后，培養(yǎng)基一般清激，保持原色。細絲可以在顯微鏡下觀察到。初，一些真菌類似于死細胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚>比較容易區(qū)分。此外，它們會慢慢長出細細的黑色細絲，因為它們生長得比較慢，不像細菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基禎污染s它們將很難存活。

解決方法:一旦被真菌污染，果斷丟棄，然后對細胞房、CO2培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進行消毒。