大部分elisa檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集,應(yīng)留意防止溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有菌體污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP。也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。

一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4°C。超越一周測定的需20C保存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡?；鞚峄蛴谐练e的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,弄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應(yīng)留意無菌操作,也可參加適當(dāng)防腐劑。

ELISA試劑盒檢測血清的詳細(xì)留意事項:

1)要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。

2)冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果,然后引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,重復(fù)倒置混勻即可。

3)標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉積后取上清檢測。

4)樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則菌體的成長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果；二則-些菌體的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。

5)血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則可以在2~8°C下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長期保存，應(yīng)在-70°C以下。

以上是詳解血清ELISA檢測的注意事項，希望可以幫助到大家。