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人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA Kit說明書

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人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA Kit說明書


辣根過氧化物酶(HRP)是一種糖蛋白,每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素(protonhemin)區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的zui大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的zui大吸收峰是275nm,所以酶的濃度和純度計(jì)算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,酶濃度以 mg/ml 計(jì)算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP純度(RZ)=A403nm/A275nm純度RZ(Reinheit Zahl)值越大說明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右,zui高可達(dá)3.4。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在3.0以上。

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ELISA的基本原理有三條: 
    (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
    (2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性; 
    (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。 

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