大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內，如標本數(shù)量多，*使用多道移液器加樣。

3. 孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。

5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。

7. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

標本的采集和保存
◎可用作ELISA的標本十分廣泛，體液（如血清，血漿，各種積液），分泌物（如唾液）和排瀉物（如糞便，尿液）均可作為標本以測定其中的抗原或抗體成分，一般使用血清。
n 標本采集時應盡量避免溶血，因紅細胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質干擾立可讀方法的結果，可造成假陽性；長菌的標本同樣的道理易產生假陽性。
◎抗凝不*的標本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。
◎標本在冰箱中保存時間過長易導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天內完成測試。如需保存一周以上則要-20℃冰凍保存，融解時應上下顛倒充分混勻，同時避免氣泡。
◎ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標本間的污染要盡量避免，尤其不應與生化試驗用同一管標本.zui起碼應先做免疫后做生化.
附：內外干擾物質的影響分析
          溶血     脂濁       RF        自身抗體     AFP        補體      肝素        EDTA
A    0.165    0.200      0.250      0.264        0.186     0.146     0.183       0.126
S    0.023    0.016      0.007      0.029        0. 010    0. 007    0.019       0.013
A對照0.151  0.195      0.195      0.195       0 .116     0.116     0.116      0.116
S    0.038    0.008      0. 008      0.008       0.018      0.018     0.018      0.018
P   > 0.05   > 0.05    < 0.01     < 0.01      < 0.01     < 0.01     <0.01   <0.01

大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒