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江萊生物-中國老牌試劑供應商

細胞樣本的前處理

時間:2015-9-14閱讀:157
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一、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細胞樣本的前處理:

1、細胞沉淀的收集:

① 懸浮細胞: 對于懸浮培養(yǎng)的細胞,直接通過離心收集細胞沉淀,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。

② 貼壁細胞: 對于貼壁培養(yǎng)的細胞,用*將細胞消化下來,或用細胞刮將細胞刮下來,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。

我們一般建議客戶,細胞密度不要小于一百萬個/ml。

2、細胞沉淀的洗滌:

在細胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等滲), 輕輕顛倒混勻,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。

重復上述操作反復洗滌1~2次。

3、勻漿的方式:手工勻漿,超聲破碎,裂解液裂解,反復凍融。

① 手工勻漿:在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中(2ml玻璃勻漿管),將玻璃勻漿管置于冰水混合物中,手動勻漿3分鐘,然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。

② 超聲破碎:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,在冰水浴條件下進行如下操作:

     a、用超聲粉碎機進行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復3~5次。

      b、用超聲細胞破碎儀,300W功率,每次超聲3~5秒,間隔30秒,重復4~5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的,或者說作用力量強弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑,zui厲害,基本可以把細胞*破掉,DNA會釋放出來,裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40,也是常用的細胞裂解液成分之一,在保護蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會使蛋白變性失活)。

去垢劑屬性只是一方面,buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不*用裂解液進行裂解。

④ 反復凍融:

在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,放低溫冰箱中結(jié)冰,溶解,再結(jié)冰,再溶解,反復3次左右)。

                由于反復凍融對酶活力影響較大,一般不*使用


產(chǎn)品:

川烏對照品/標準品
青皮對照品/標準品
CAS:73069-13-3,白術(shù)內(nèi)酯 I標準品/對照品
β-倒捻子素標準品,cas:20931-37-7對照品
*對照品/標準品
蓖麻子對照品/標準品
*對照品/標準品
水翁花對照品/標準品
CAS:38963-94-9,覆盆子酮葡萄糖苷標準品/對照品
紫河車對照品/標準品
CAS:1836-77-7,草枯醚標準品/對照品價格
Melicopine標準品,cas:568-01-4對照品
牛黃對照品/標準品
*對照品/標準品
白花前胡乙素標準品/對照品
鹽酸*對照品/標準品
補骨脂定標準品,cas:18642-23-4對照品
4-羥基苯甲酸對照品/標準品
細辛脂素標準品,cas:133-04-0對照品
*對照品/標準品
氫化肉桂醇標準品,cas:122-97-4對照品
瓦松對照品/標準品
鹽酸*對照品/標準品
原花青素C標準品,cas:65085-09-8對照品
老蛇蓮對照品/標準品
*對照品/標準品
*標準品/對照品
CAS:63492-69-3,紫草氰苷標準品/對照品
*標準品/對照品
CAS:757202-06-5,林澤蘭內(nèi)酯 A標準品/對照品
*對照品/標準品
*標準品/對照品
CAS:7440-55-3,鎵標準溶液標準品/對照品價格
*對照品/標準品
小薊對照品/標準品
*標準品/對照品
嘧菌環(huán)胺標準品|對照品
(+)-沒食子兒茶素標準品,cas:970-73-0對照品
苯甲醛標準品/對照品
*標準品/對照品
*標準品/對照品
鹽酸*對照品/標準品
十七碳酸甲酯對照品/標準品
美雄諾龍對照品/標準品
*對照品/標準品
CAS:27975-19-5,異甜菊醇標準品/對照品
白花前胡素E標準品,cas:78478-28-1對照品
水翁花對照品/標準品
大黃酸標準品,cas:478-43-3對照品
*B對照品/標準品
氯吡脲標準品|對照品,cas:68157-60-8
CAS:66663-90-9,桔梗皂苷D2標準品/對照品
二氯甲烷對照品/標準品
CAS:34883-41-5,3,5-二氯聯(lián)苯標準品/對照品價格
*對照品/標準品
華蟾酥毒基對照品/標準品
麥角甾醇對照品/標準品
*對照品/標準品
牛白藤對照品/標準品
*對照品/標準品
小檗皮對照品/標準品
惡唑磷標準品|對照品,cas:18854-01-8
甲霜靈標準品|對照品,cas:57837-19-1
分散藍35標準品|對照品,cas:12222-75-2
硫酸小檗堿標準品,cas:633-66-9對照品
浮萍對照品/標準品
*標準品/對照品
呋喃丙胺雜質(zhì)A對照品/標準品
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CAS:2602-46-2,直接藍6標準品/對照品價格
*標準品/對照品
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環(huán)維黃楊星D對照品/標準品
熟地黃標準品/對照品
CAS:10004-44-1,惡霉靈標準品/對照品價格
乳氟禾草靈標準品|對照品,cas:77501-63-4
野漆樹苷標準品,cas:17306-46-6對照品
鹽酸*標準品/對照品
乙醇標準品/對照品
人參皂苷Rf對照品/標準品
*對照品/標準品
*對照品/標準品
烏梅對照品/標準品
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CAS:545-47-1,羽扇豆醇標準品/對照品
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*對照品/標準品
*系統(tǒng)適用性對照品對照品/標準品
羥苯甲酯(對羥基苯甲酸甲酯)標準品/對照品
脫水差向四環(huán)素對照品/標準品
甲基硫菌靈標準品/對照品價格
遠華蟾毒精標準品,cas:472-26-4對照品
苯對照品/標準品
CAS:2035-15-6,高麗槐素標準品/對照品
地*標準品/對照品
沙門、志賀菌屬瓊脂(SS)對照培養(yǎng)基
CAS:55750-84-0,西紅花苷 II標準品/對照品
*堿標準品/對照品
CAS:589-68-4,1-肉豆蔻酸單甘油酯標準品/對照品
乙酰蝙蝠葛蘇林堿標準品,cas:132139-17-4對照品

ight:14.25pt;width:303.00pt;">CAS:20183-47-5,細葉遠志皂苷標準品/對照品 6,7-二甲氧基香豆素標準品/對照品    

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