1. | 在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。 |
2. | 分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。 |
3. | 每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。 |
4. | 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2~3代。 |
5. | 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。 |
6. | 重復步驟4。 |
7. | 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代,確定污染是否以已被消除。 |
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