豬磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒
實驗名稱： 豬磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒 ，常用實驗名稱： 豬磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒 ，常用實驗別名： 豬磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒
規(guī)格： 48T/96T
貯藏：2-8℃,避光防潮保存
有效期：6個月
用途：本產(chǎn)品僅供科研，不能用于臨床診斷
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豬磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒性能:
準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。
靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內(nèi),板間變異系數(shù)均小于15%。
豬磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒操作方法：
一、雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
二、間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
