骨髓瘤,SP2/0
【研究范圍】僅供科研使用
【細(xì)胞特征】每兩到三天進(jìn)行換液。細(xì)胞應(yīng)當(dāng)在融合前傳代
【細(xì)胞培養(yǎng)表述】
一、態(tài)觀察。細(xì)胞膜是每天必須觀察的,看是否清晰,細(xì)胞的死亡往往是從細(xì)胞膜的破裂開始的,早期的表現(xiàn)就是細(xì)胞膜某一點(diǎn)出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。
二、細(xì)胞往往會(huì)有“抱團(tuán)"現(xiàn)象,抱團(tuán)生長或死亡,個(gè)人認(rèn)為應(yīng)該勤換液或傳代,盡量避免細(xì)胞抱團(tuán)。
三、長迅速,強(qiáng)烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng),用小瓶養(yǎng)的話,換液不及時(shí),很容易死亡。細(xì)胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代,并且一般為一傳三,或一傳四。
四、培養(yǎng)液:1640培養(yǎng)液,1L一般加*2g,并加雙抗,胎牛血清濃度*為12%,zui低不低于10%,細(xì)胞對胎牛血清高度依賴。培養(yǎng)液PH應(yīng)調(diào)為7.20-7.40之間。
五、防污染。細(xì)胞生長迅速,較少發(fā)生污染,但常規(guī)措施應(yīng)該做好。比如無菌操作,酒精消毒等,培養(yǎng)瓶口建議過火,包括瓶蓋,應(yīng)過火4秒左右。
六、凍存。-20一小時(shí),-80一夜,液氮*保存。強(qiáng)烈建議液氮*保存,盡量不要在-80*保存,死亡率很高。
七、復(fù)蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃,并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液,使培養(yǎng)液溫度與室溫*。1分鐘內(nèi)融化細(xì)胞(禁止搖晃凍存管),移取至試管內(nèi),動(dòng)作要輕,從試管管底開始慢慢上提移液管,使細(xì)胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻,離心,洗2次。
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