扁豆凝集素(LCA)ELISA試劑盒本試劑盒用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中該產(chǎn)品水平。用純化的本產(chǎn)品抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入本產(chǎn)品抗原，再與HRP標(biāo)記的本產(chǎn)品抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的本產(chǎn)品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中該產(chǎn)品濃度。

試劑盒組成：

扁豆凝集素(LCA)ELISA試劑盒標(biāo)本要求： 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1200 ng/L，800 ng/L ，400 ng/L，200ng/L， 100 ng/L）。
• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

• 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
• 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
• 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
• 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
• 底物請(qǐng)避光保存。
• 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
• 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
• 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，    

在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD      

值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)      

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。                                                               

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于9%和11%     

扁豆凝集素(LCA)ELISA試劑盒保存條件及有效期：

1.試劑盒保存；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

扁豆凝集素(LCA)ELISA試劑盒其它產(chǎn)品P-1153-5    乳糖蛋白胨培養(yǎng)液    250g    用于腸道菌生化試驗(yàn)（復(fù)發(fā)酵）（GB）    
P-1153    0.5%乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基    250g    用于腸道菌生化試驗(yàn)（復(fù)發(fā)酵）    
原   料                
P-0004    蛋白胨(國(guó)產(chǎn))    250g    本品為動(dòng)物蛋白胰酶消化產(chǎn)物，富含多肽，寡肽及游離氨基酸成分。為微生物提供有機(jī)氮源    
P-0006    牛肉浸出粉（國(guó)產(chǎn)）    250g    本品為牛肉經(jīng)胰酶輕度消化而制成的淺黃色粉末，富含糖類、有機(jī)氮、水溶性維生素及無(wú)機(jī)鹽    
P-0010    蛋白胨（進(jìn)口）    250g    本品為動(dòng)物蛋白胰酶消化產(chǎn)物，富含多肽，寡肽及游離氨基酸成分。為微生物提供有機(jī)氮源    
P-0011    胰酪蛋白胨    250g    本品為干酪素胰酶消化產(chǎn)物，富含色氨酸，適宜做靛基質(zhì)及糖發(fā)酵試驗(yàn)。為微生物提供有機(jī)氮源    
P-0012    牛肉浸出粉（進(jìn)口）    250g    本品為牛肉經(jīng)胰酶輕度消化而制成的淺黃色粉末，富含糖類、有機(jī)氮、水溶性維生素及無(wú)機(jī)鹽    
P-0013    細(xì)菌瓊脂粉（國(guó)產(chǎn)）    250g    本品為江蘺提取的藻膠，為瓊脂糖和瓊膠質(zhì)組成的長(zhǎng)鏈多糖復(fù)合體    
P-0014    牛膽鹽    100g    為牛膽汁中提取的鈉鹽，含膽色素、膽汁酸鹽及各種無(wú)機(jī)離子    
P-0015    酸水解酪蛋白    250g    提供微生物生長(zhǎng)所需生長(zhǎng)因子，為培養(yǎng)基原材料    
P-0016    去氧膽酸鈉    100g    為動(dòng)物膽汁深加工鈉鹽，有刺激性苦味，易吸濕    
P-0017    酵母浸出粉（國(guó)產(chǎn)）    250g    本品為酵母細(xì)胞的自溶物經(jīng)濃縮，噴霧干燥而成的粉狀物，酵母粉富含B族微生物，有機(jī)氮以及碳水化合物    
P-0018    大豆蛋白胨    250g    為大豆粉木瓜蛋白酶水解產(chǎn)物，富含多種碳水化合物，氮含量較高    
P-0020    細(xì)菌學(xué)瓊脂粉（進(jìn)口）    250g    本品為石花菜提取的藻膠，為瓊脂糖和瓊膠質(zhì)組成的長(zhǎng)鏈多糖復(fù)合體    
P-0021    玉米浸出粉    250g    培養(yǎng)基原料，為微生物提供豐富的營(yíng)養(yǎng)成分    
P-0022    馬鈴薯浸出粉    250g    培養(yǎng)基原料，為微生物提供豐富的營(yíng)養(yǎng)成分    
P-0029    酵母浸出粉（進(jìn)口）    250g    本品為酵母細(xì)胞的自溶物經(jīng)濃縮，噴霧干燥而成的粉狀物，酵母粉富含B族微生物，有機(jī)氮以及碳水化合物    
P-0040    無(wú)水葡萄糖    250g    本品為微生物生長(zhǎng)提供必需的碳源