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KB細(xì)胞人口腔上皮癌

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KB細(xì)胞人口腔上皮癌細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的*消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過(guò)5分鐘??梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái),加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或*/*(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
人垂草扁桃酸(VMA) ELISA試劑盒
人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒
人血凝素(HA)ELISA試劑盒
人脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)ELISA試劑盒
人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)ELISA試劑盒
人鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒
人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISA試劑盒
人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒
人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒
人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)ELISA試劑盒 
人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)ELISA試劑盒 
人羥*糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒
人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒
人低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒
人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒
人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒
人骨堿性磷酸酶(BALP)ELISA試劑盒
人*(CTX)ELISA試劑盒
人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA試劑盒
人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒
人β羥丁酸(β-OHB)ELISA試劑盒
人高密度脂蛋白*(HDL-C)ELISA試劑盒
人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒
人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)ELISA試劑盒
人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒
人低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒
人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒
人α*S轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒
人同型半*(Hcy)ELISA試劑盒
人游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒
人骨粘連蛋白(ON)ELISA試劑盒
人*(FA)ELISA試劑盒
人內(nèi)毒素(ET)ELISA試劑盒
人過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA試劑盒
人*A(CsA)ELISA試劑盒
人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒
人15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒
人*酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒
人白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒
人*(Cyt-C)ELISA試劑盒
人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒
人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒
人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒
人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒
人脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒
人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒
人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒
人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA試劑盒
人吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒
人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒
人γ氨基丁酸(GABA)ELISA試劑盒 
人P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒
人環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒
T淋巴細(xì)胞群CD3檢測(cè)試劑盒
T淋巴細(xì)胞群CD4檢測(cè)試劑盒
T淋巴細(xì)胞群CD8檢測(cè)試劑盒
蛋白酶A(ProteaseA)檢測(cè)試劑盒
蛋白酶B(ProteaseB)檢測(cè)試劑盒
羧肽酶Y(CarboxypeptidaseY)檢測(cè)試劑盒
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磺胺類(lèi)藥物(三合一)檢測(cè)試劑盒
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磺胺二甲氧嘧啶檢測(cè)試劑盒
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