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增強(qiáng)的基因組編輯技術(shù)幫助改造T細(xì)胞

時間:2015/7/28閱讀:289
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科研人員報告了一種基因組編輯策略,它能增強(qiáng)改造人類T細(xì)胞的效率。盡管近來取得了使用CRISPR/Cas9工具的基因組編輯的進(jìn)展,對人類T細(xì)胞基因組進(jìn)行有效而專一的編輯仍然是一個挑戰(zhàn)。使用由Cas9蛋白和實驗室產(chǎn)生的單導(dǎo)向RNA分子組成的Cas9 核蛋白(Cas9 RNPs),Alexander Marson 及其同事有效而專一地編輯了CXCR4的DNA序列,CXCR4為人類助手T細(xì)胞表面的一個免疫受體編碼,該受體讓艾滋病病毒成為可能。他們使用一種瞄準(zhǔn)被編輯的蛋白質(zhì)的細(xì)胞分類技術(shù)分離出了這種修改后的細(xì)胞,并且使用深度測序證實了這類編輯。此外,這組作者把Cas9 核蛋白(Cas9 RNPs)與一個稱為同源導(dǎo)向修復(fù)模板的定制設(shè)計的單鏈DNA分子結(jié)合起來,從而選擇性地取代了從健康捐獻(xiàn)者分離出來的人類T細(xì)胞CXCR4 的核苷酸。使用一種類似的方法,這組作者證明了PD1 的靶向核苷酸取代,PD1為人類T細(xì)胞的一個免疫檢查點蛋白編碼,它是癌癥免疫療法的一個成熟的靶標(biāo)。由于短壽命的Cas9 核蛋白(Cas9 RNPs)通常在傳送到細(xì)胞后的24小時后轉(zhuǎn)變,在目標(biāo)是改造人類原生T細(xì)胞從而應(yīng)對免疫系統(tǒng)疾病的策略中,它們可能比讓細(xì)胞暴露在Cas9種的方法更安全。


原文檢索:Generation of knock-in primary human T cells using Cas9 ribonucleoproteins

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