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ELISA試劑盒的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化

時(shí)間:2017/3/14閱讀:613
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ELISA試劑盒的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化

在ELISA試劑盒試驗(yàn)條件(包含試劑)較難確保穩(wěn)定的情況下,這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后,核算S/N值。也有寫作P/N的,這兒的P不代表陽性(positive),而是?。╬atient)的縮寫,不該誤解。為防止混雜,更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA試劑盒中,有些作者定出S/N為陽性規(guī)范,現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿襲。
實(shí)際上每一測(cè)定體系應(yīng)該用試驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,致使反響后產(chǎn)生的本底也許較正常人血清的本底低得多。陽性斷定值(cut-off value)通常為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),以此作為判別成果陽性或陰性的規(guī)范。ELISA試劑盒用此法判別成果請(qǐng)求試驗(yàn)條件非常穩(wěn)定,陽性和陰性的對(duì)照品應(yīng)契合必定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴(yán)厲按規(guī)則操作。陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中通過對(duì)很多標(biāo)本的試驗(yàn)檢查而得到的。
ELISA試劑盒現(xiàn)舉某種檢查HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后,先核算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX),兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400),試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此規(guī)模,則棄去,而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新核算NCX;如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上規(guī)模,則該次試驗(yàn)無效。陽性斷定值按下式核算: 
ELISA試劑盒陽性斷定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性斷定值的為陽性,小于陽性斷定值的為陰性。應(yīng)留意的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,ELISA試劑盒而不是對(duì)各種試劑均可通用。

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