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全基因擴(kuò)增預(yù)配液*

時(shí)間:2014/9/18閱讀:694
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全基因擴(kuò)增預(yù)配液 人線粒體基因組的特點(diǎn): 1、人線粒體基因組為16,569bp的雙鏈閉環(huán)分子,一條鏈為重鏈(H),一條鏈為輕鏈(L),兩條鏈均有編碼功能,每個(gè) mtDNA分于編碼13種蛋白質(zhì)和24種結(jié)構(gòu)RNA(22rRNA,2tRNA) 2、線粒體DNA為母系遺傳. 3、結(jié)構(gòu)基因不含內(nèi)含子,部分區(qū)域有基因重疊,因此病理性mtDNA突變更易發(fā)生. 4、mtDNA突變頻率更高. 5、線粒體DNA突變的表型表達(dá)與核DNA不同。 第四節(jié) 細(xì)菌和病毒基因組

一、細(xì)菌基因組的特點(diǎn)。 1.功能相關(guān)的幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因往往***在—起,受它們上游的共同調(diào)控區(qū)控制,形成操縱子結(jié)構(gòu), 2.結(jié)構(gòu)基因中沒有內(nèi)含子,也無重疊現(xiàn)象。 3.細(xì)菌DNA大部分為編碼序列。

二、病毒基因組的特點(diǎn) 1.每種病毒只有一種核酸,或者DNA,或者RNA 2.病毒核酸大小差別很大,3X1033X106bp 3.除逆病毒外,所有病毒基因都是單拷貝的。 4.大部份病毒核酸是由一條雙鏈或單鏈分子(RNADNA),僅少數(shù)RNA病毒由幾個(gè)核酸片段組成. 5.真核病毒基因有內(nèi)含子,而噬菌體(感染細(xì)菌的病毒)基因中無內(nèi)含子. 6.有重疊基因.全基因擴(kuò)增預(yù)配液

轉(zhuǎn)錄后加工在細(xì)胞核內(nèi)對(duì)基因產(chǎn)物(mRNA前體)進(jìn)行各種修飾、剪接和編輯,使編碼蛋白質(zhì)的外顯子部分連接成為一個(gè)連續(xù)的開放讀 (open reading frame,ORF)的過程稱為轉(zhuǎn)錄后加工.一、mRNA前體加工的分子機(jī)制 - 核內(nèi)mRNA前體—異質(zhì)性核RNA(heterogeneous nuclear RNAhnRNA), hnRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核異質(zhì)性核糖核蛋白(hnRNP), mRNA前體的加工在hnRNP上進(jìn)行. ()5-端加帽(capping) mRNA前體的5-端加甲基化鳥苷(m7pppN) 5’端m7G帽子結(jié)構(gòu)的作用: 1.使mRNA更穩(wěn)定 2.增加蛋白質(zhì)合成的效率 3.帽子結(jié)構(gòu)對(duì)mRNA前體的剪接是必需的(二)3-端接多聚腺苷(poly(A)) —在mRNA前體3’端接上一個(gè)約200250個(gè)腺嘌呤核苷酸(A)的尾巴。 poly(A)尾巴的作用: 1.有利于mRNA通過核孔; 2.參與穩(wěn)定mRNA全基因擴(kuò)增預(yù)配液 3.增強(qiáng)翻譯效率。(三)mRNA前體的剪接剪接(sp!icing)—剪除內(nèi)含子,并將外顯子連接 1.真核內(nèi)含子的序列特征:真核內(nèi)含子總是由Gu開始,以AG結(jié)束,內(nèi)含子的5-端剪接點(diǎn)(供位)3-端剪接點(diǎn)(受位), 以及內(nèi)含子中的一個(gè)內(nèi)部序列分支點(diǎn)(branch site)mRNA前體正確剪接所必需的。 2mRNA前體的剪接機(jī)制 -剪接過程由二步連續(xù)的轉(zhuǎn)酯反應(yīng)組成.該過程中產(chǎn)生一個(gè)套索狀中間體( lariat intermediate),結(jié)果使2個(gè)原先被分隔的外顯子連接。 3.剪接體(spliceosome) 細(xì)胞核內(nèi)的小分子RNA(一般≤300堿基)SnRNAsmall nuclear RNA),包括U1U6等。 snRNA與特異的蛋白質(zhì)形成復(fù)合物-SnRNPmRNA前體與snRNP形成的復(fù)合物—剪接體.mRNA前體的剪接通過剪接 體進(jìn)行。

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