ELISA試劑盒方法的基本操作原理介紹

常用的小鼠Ⅻ型膠原(COL12)試劑盒法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗：是酶免疫測定技術(shù)中應用zui廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體( 聚苯乙烯微量反應板 )表面，使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

1、競爭ELISA：此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測定。

其基本程序為：

① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原小鼠Ⅻ型膠原(COL12)試劑盒（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

   被結(jié)合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結(jié)構(gòu)不同，還需應用不同的結(jié)合方法。此外試驗中應用酶標抗原的量較多。

2、阻斷ELISA

   本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬?。?/span>PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。

下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：

① 小鼠Ⅻ型膠原(COL12)試劑盒100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。

本試驗同時設(shè)標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。

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