15羥二十烷四烯酸(15S-HETE)ELISA試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中15羥二十烷四烯酸(15S-HETE)的含量。
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15羥二十烷四烯酸(15S-HETE)ELISA試劑盒操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2、 棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內(nèi)配制），酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。
3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。
5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標準孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止）。
7、 每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應(yīng)提前打開酶標儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
9、 實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
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| 8-特前列腺素F2a ELISA試劑盒 |
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