人白三烯D4Elisa試劑盒生產(chǎn)商,人(LTD4)說明書

本試劑僅供研究使用      

目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中白三烯D4(LTD4)的含量。
實驗原理：
   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白三烯D4(LTD4)水平。用純化的人白三烯D4(LTD4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白三烯D4(LTD4)，再與HRP標(biāo)記的白三烯D4(LTD4)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白三烯D4(LTD4)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中人白三烯D4(LTD4)濃度。

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2.    加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.    溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.    配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.    加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.    溫育：操作同3。
8.    洗滌：操作同5。
9.    顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
10.    終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.    測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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