細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

摘要：在293T細(xì)胞中過表達(dá)human Oct-4基因， 通過CCK-8方法對(duì)Oct-4過表達(dá)細(xì)胞組、空細(xì)胞組與陰性對(duì)照組的細(xì)胞增殖進(jìn)行定量，研究Oct-4基因?qū)?93T細(xì)胞增殖能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Oct-4基因的表達(dá)促進(jìn)293T細(xì)胞的增殖能力。為進(jìn)一步深入研究Oct-4基因的功能提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
關(guān)鍵詞：Oct-4，CCK¬¬-8，細(xì)胞增殖，293T

一、 實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞；同時(shí)，多細(xì)胞生物可以由一個(gè)受精卵，經(jīng)過細(xì)胞的分裂和分化，zui終發(fā)育成一個(gè)新的多細(xì)胞個(gè)體。通過細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK-8等方法。

二、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
用質(zhì)粒Oct-4-EGFP轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞與正常細(xì)胞組、陰性對(duì)照組進(jìn)行比較分析，考察Oct-4基因?qū)?xì)胞的增殖能力產(chǎn)生的影響。采用CCK-8 法對(duì)3組細(xì)胞進(jìn)行比較分析。

三、 實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)共分以下5個(gè)主要步驟：
1. 收集細(xì)胞：
收集細(xì)胞：將293T細(xì)胞消化后制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后，每組細(xì)胞配成一定濃度的單細(xì)胞懸液。
2. 細(xì)胞鋪板：
細(xì)胞配成2×104cell/ml后，每孔鋪100μl細(xì)胞，即2000cell/well。一般每個(gè)樣品設(shè)5~6個(gè)復(fù)孔，邊緣孔加100μl無(wú)菌水或者PBS。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：
     16h后，按照轉(zhuǎn)染試劑說明書轉(zhuǎn)染細(xì)胞（0.2μg質(zhì)粒，0.5μl和元生物轉(zhuǎn)染試劑）。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)6、24、48、72h后CCK-8處理，酶標(biāo)儀檢測(cè)：
轉(zhuǎn)染后， 在每個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)加入10μl的CCK-8于孔中，無(wú)需換液。3h后，酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm OD值。
5. 統(tǒng)計(jì)分析：
GraphPad Prism（Ver5，GraphPad Software） 作圖，并進(jìn)行雙側(cè)t檢驗(yàn)。

四、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
                                                    表1. 293T過表達(dá)Oct-4基因CCK-8檢測(cè)數(shù)據(jù)（平均值，每組五次重復(fù)）

                                                      圖1. 過表達(dá)Oct-4對(duì)293T細(xì)胞增殖能力的影響

結(jié)論：從實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析可以發(fā)現(xiàn)，293T細(xì)胞在過表達(dá)Oct-4-EGFP后，72h時(shí)增殖能力均高于空細(xì)胞組以及對(duì)照組（p<0.001）。

五、 參考文獻(xiàn)
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