免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。免疫組織化學的方法有多種，其實都大同小異，不同點只是在于顯色基團！
　　
　　SP法
　　
　　1）脫蠟、水化；
　　
　　2）PBS洗2～3次各5分鐘；
　　
　　3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘；
　　
　　4）PBS洗2～3次各5分鐘；
　　
　　5）抗原修復；
　　
　　6）PBS洗2～3次各5分鐘；
　　
　　7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
　　
　　8）滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時或者4℃過夜或者37℃1小時。
　　
　　9）4℃過夜后需在37℃復溫45分鐘。
　　
　　10）PBS洗3次各5分鐘；
　　
　　11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室溫靜置，或37℃1小時；
　　
　　12）II抗中可加入0.05%的tween-20。
　　
　　13）PBS洗3次各5分鐘；
　　
　　14）DAB顯色5～10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度；
　　
　　15）PBS或自來水沖洗10分鐘；
　　
　　16）蘇木精復染2分鐘，鹽酸酒精分化；
　　
　　17）自來水沖洗10～15分鐘；
　　
　　18）脫水、透明、封片、鏡檢。
　　
　　SABC法
　　
　　1）脫蠟、水化。
　　
　　2）PBS洗兩次各5分鐘。
　　
　　3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10分鐘，蒸餾水洗3次。
　　
　　4）抗原修復。
　　
　　5）PBS洗5分鐘。
　　
　　6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
　　
　　7）滴加Ⅰ抗，室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時（4℃過夜后在37℃復溫45分鐘）。
　　
　　8）PBS洗三次每次2分鐘。
　　
　　9）滴加*化二抗，20℃～37℃20分鐘。
　　
　　10）PBC洗3次每次2分鐘。
　　
　　11）滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鐘。
　　
　　12）PBS洗4次每次5分鐘。
　　
　　13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。
　　
　　14）蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
　　
　　15）脫水、透明、封片、鏡檢。
　　
　　二者區(qū)別：
　　
　　sp法是：一抗＋*化二抗＋HRP標記的鏈霉卵白素（HRP標記的親和素）
　　
　　酶標親和素-*技術（labelledavidin-biotintechnique，簡稱LAB法）。即用辣根過氧化物酶直接標記avidin，用biotin標記2抗。
　　
　　關鍵步驟為3步：
　　
　　Ag+Ab1+（Ab2-B）+A★
　　
　?。ˋ★為HRP標記的卵白素）A★與2抗的*結合，avidin起橋聯(lián)作用。如將該法中的卵白素（avidin）變換成鏈霉卵白素（streptavidin），LAB法即成LsAB法，或稱SP法。
　　
　　據(jù)認為LAB法比ABC法敏感2~4倍，而LsAB法因streptavidin不與組織細胞中內源性*結合而特異性更高?，F(xiàn)在SP法已趨于取代ABC法而廣為應用。
　　
　　sabc法是：一抗＋*化二抗＋abc復合物（是使用前親和素與酶聯(lián)*現(xiàn)配使用）
　　
　　親和素-*-過氧化物酶復合物技術（avidin-biotin-peroxidasecomplextechnique，簡稱ABC法）。
　　
　　關鍵的程序步驟為3步：
　　
　　Ag+Ab1+（Ab2-B）+AB★C復合物
　　
　?。ˋb2-B為*標記的第二抗體）（B★為*標記的過氧化物酶）AB★C復合物是avidin與酶聯(lián)biotin1比1在使用前30min配置，混勻。1個avidin分子結合了3個biotin分子，剩下1個結合點與2抗的*結合，avidin起橋聯(lián)作用。ABC法敏感性更高，比PAP法敏感20~40倍，背景也更清晰。
　　
　　個人理解：SP法和SABC法相差不大，一般都可以用.
　　
　　SP法：
　　
　　一抗+*標記二抗+辣根酶標記鏈霉卵白素+辣根酶底物顯色
　　
　　SABC法：
　　
　　一抗+*標記二抗+滴加試劑SABC（鏈霉卵白素+辣根酶標記*）+辣根酶底物顯色
　　
　　比較可知，SABC法SP法在原理上基本是一樣的。但由于SABC法第3步有放大作用，所以更靈敏一些.可能會出現(xiàn)用SABC法可以做出結果的，用SP法做不出來.總的來說，個人認為SABC法可能好一些！我自己以及周圍的同學以前一般都是選用SABC法！
　　
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