本檢測(cè)方法是用來果膠酶的催化活性。本方法適用于各種固體和液體果膠酶制劑。
[說明]
本方法適合于果膠酶的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制領(lǐng)域。但不是本公司產(chǎn)品及其它公司產(chǎn)品的活力的預(yù)測(cè)，而各種酶制劑的zui終的酶活力在良好的實(shí)驗(yàn)操作下仍可發(fā)揮出更好的催化活力。
[原理]
果膠物質(zhì)主要存在于植物初生壁和細(xì)胞中間，果膠物質(zhì)是細(xì)胞壁的基質(zhì)多糖。果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質(zhì)上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進(jìn)行半乳醛酸的定量,從而測(cè)定果膠酶活力。
[果膠酶活力單位定義]
1g(或1ml液體酶)酶粉,于50.0℃、pH3.5條件下,每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個(gè)活力單位。
1.試劑和儀器
*本標(biāo)準(zhǔn)所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純
1.1醋酸
1.2碘
1.3碘花鉀
1.4濃硫酸
1.5果膠（sigma公司）
1.6*
1.7碳酸鈉
1.8可溶性淀粉
1.9水浴鍋
1.10碘量瓶
2.試劑的制備
2.1pH3.5的酸水
用醋酸將蒸餾水調(diào)至3.5
2.21%果膠溶液：
準(zhǔn)確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻后過濾，定至100ml。
2.20.1N碘液：
準(zhǔn)確稱取*5g，用蒸餾水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。
2.30.025mol/L*：
準(zhǔn)確稱取6.2g*，加蒸餾水后定容至1L
2.40.5%可溶性淀粉指示劑：
準(zhǔn)確稱取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.51M碳酸鈉溶液：
準(zhǔn)確稱取10.6g碳酸鈉，定容于100ml的水中
2.62N硫酸：
吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中
2.7酶樣的制備
準(zhǔn)確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小時(shí)，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經(jīng)稀釋100倍。
3.程序
3.1取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（PH3.5），在50℃水浴中保溫反應(yīng)1小時(shí)。
3.2取出后加熱煮沸2~3min，冷卻后，補(bǔ)水至20ml。
3.3取5ml反應(yīng)液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸鈉溶液1ml，0.1N碘液5ml，搖勻，具塞，于室溫暗處下放置20min。
3.4取出后加2N硫酸2ml，立即用0.05N*溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為止。
3.5空白試驗(yàn)以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進(jìn)行滴定。
3.6每個(gè)酶樣zui少做兩個(gè)平行樣。
4.計(jì)算
4.1將測(cè)得的各平行樣求OD值的均值。
4.2計(jì)算酶的活性單位依據(jù)以下公式
酶的活力=[(B-A)*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60]
單位：U/g(ml)
式中：A：樣品滴定所消耗*的毫升數(shù)。
B：空白滴定所消耗*的毫升數(shù)。
N：*摩爾濃度。
0.5：1當(dāng)量*相當(dāng)于0.5當(dāng)量半乳糖醛酸。
20：反應(yīng)液總體積
51：酶液體積以1ml計(jì)
52：吸取反應(yīng)液
n：稀釋倍數(shù)
W：酶粉重量g或酶液體積ml
隨機(jī)推薦
•果膠酶活力的測(cè)定
乙試劑稱取鉬酸銨[（NH4）MO7O24•4H2O]25g溶于450mL水中，再緩慢加入濃硫酸21mL。另取25mL水，溶解純結(jié)晶shen酸二鈉（Na2HAsO4•7H2O）3g（可用H4As2O71.28g，以1mol/LNaOH19.24mL溶解，再加水4.75mL代替此液）。然后慢慢加入上述溶液中，充分混合，在37℃放置24～48h，
•地高辛注射液_
激動(dòng)心肌收縮蛋白從而增加心肌收縮力，2負(fù)性頻率作用：由于其正性肌力作用，使衰竭心臟心輸出量增加，血流動(dòng)力學(xué)狀態(tài)改善，消除交感神經(jīng)張力的反射性增高，并增強(qiáng)迷走神經(jīng)張力，因而減慢心率，此外，小劑量時(shí)提高竇房結(jié)對(duì)迷走神經(jīng)沖動(dòng)的敏感性，可增強(qiáng)其減慢。
•濃縮透明紅葡萄汁
如果用6000轉(zhuǎn)/分，定額為5000升/小時(shí)的離心分離機(jī)，只達(dá)到3600升/小時(shí)的分離效率就比較滿意。7.滅酶：分離果醬以后的葡萄汁仍然是混濁汁，此時(shí)帶酶果汁用平板熱交換器或管式消毒器滅酶、滅酶條件85℃，15秒。滅酶后立。
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