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利用CRISPR/CAS9對人類干細(xì)胞系進(jìn)行可誘導(dǎo)基因敲除

閱讀：608發(fā)布時間：2017-11-28

    近日，科學(xué)家利用CRISPR/CAS9技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對人類干細(xì)胞系進(jìn)行可誘導(dǎo)基因敲除，這一方法的成功對于研究基因在干細(xì)胞及分化不同階段中的作用具有重要推動作用。

    對基因表達(dá)進(jìn)行的時間調(diào)控對于闡明一個基因在生物學(xué)系統(tǒng)中的功能至關(guān)重要，但到目前為止，在人類多能干細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)可誘導(dǎo)基因敲除，建立可誘導(dǎo)基因敲除的人類干細(xì)胞系仍存在很大挑戰(zhàn)。

    在該項(xiàng)研究中，研究人員結(jié)合CRISPR/CAS9介導(dǎo)的基因組編輯和Flp/FRT以及Cre/LoxP系統(tǒng)成功實(shí)現(xiàn)建立了可誘導(dǎo)基因敲除的人類多能干細(xì)胞系。研究人員發(fā)現(xiàn)dual-sgRNA的靶向作用對于將FRT序列進(jìn)行的雙等位基因敲入非常重要。除此之外，他們還開發(fā)了出一種新的策略將一個可調(diào)控活性的重組酶表達(dá)體系同時導(dǎo)入細(xì)胞，移除了藥物抗性基因，利用這種方法可以加快iKO hPSC細(xì)胞系的獲得速度。

    研究人員通過這種兩步法敲除策略，對人類胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞中的SOX2,PAX6,OTX2,AGO2等基因?qū)崿F(xiàn)了可誘導(dǎo)性基因敲除，建立了相關(guān)細(xì)胞系。


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